cGMP assaykit服务至上 纽斯特生物技术

***准备

1. 非乙酰化cAMP标准品

将5000 pmol/mL cAMP标准品溶液平衡至室温。从#1至#6标记六只洁净试管。移取475μL 0.1M HCl到#1号试管，400μL到#2至#6号试管。加入25μL 5000 pmol/mL cAMP标准品到#1管中，剧烈涡旋震荡。从#1管中取出100μL溶液至#2管中，涡旋震荡。以此类推，重复上步操作，梯度稀释至#6管。

经以上操作，#1至#6管中cAMP标准品浓度分别为250,50，10,2,0.4和0.08 pmol/mL（详见cAMP实验稀释详情键盘纸）。稀释过的标准品需在30分钟内使用。

标记一只试管作为无标准品空白对照（NSB）。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。

2. 洗涤液

将15 mL 10×洗涤液储液加到135 mL去离子水中，稀释成工作液。稀释液可在室温保存至***盒有效期限，或者3个月。

武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和***等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往世界。

环磷酸鸟苷（鸟苷-3′,5′-环化一磷酸，cGMP）在许多生理过程中发挥着重要的调控作用。cGMP由鸟苷酸环化酶产生，而被磷酸二酯酶降解，因此激l活鸟苷酸环化酶或者***磷酸二酯酶可以提高细胞内cGMP的含量。研究发现，cGMP特异性磷酸二酯酶的***l剂可用于治l疗人类***。

免l疫测定技术的基础在于抗原抗l体之间的特异结合反应，所以任何好的诊断l***离不开好的原料，如抗原抗l体，酶等。以前用于免l疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗l体则为纯化抗原免l疫动物后获得的多克l隆抗l体和使用杂交瘤技术得到的单克l隆抗l体，而抗原或抗l体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用***工程方法制备各种特殊的抗原或抗l体及其酶结合物等免l疫测定***几成为现实的新一代***，各种新型使用的测定方法也不断出现。

武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和***等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往。

体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照

注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Ras被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Ras被激l活。

1.        

准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Ras蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。

2.        

每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。

3.        

一个管中加入5ul的100X GTPγS（终浓度即为100 uM）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP（终浓度即为1 mM）作为阴性对照。

4.        

将离心管置于30°C条件下反应30 min并不断搅动。

5.        

终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。